结合重组酶介导的核酸等温扩增和荧光探针快速检测日本血吸虫基因片段-江苏血防所

【摘要】目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplificaion，RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28(SjG28)基因片段作为靶序列，应用 DNAMAN 70软件设计合成引物及荧光探针，建立荧光RA 反应体系。扩增不同拷贝数的sic28重组质粒评价荧光 RAA 检测的敏感性;分别以日本血吸虫、曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫基因组为模板进行荧光 RAA检测，以评价该方法的特异性。采用荧光 RAA 分别检测 500、200 和50条日本血吸虫尾蚴感染的免粪中虫卵 DNA:分别在 50 只阴性钉螺中混人1、2、3、4、5、10 只阳性钉螺，并提取 DNA 进行荧光 RAA 检测。结果以不同拷贝数的 S;G28重组质粒为模板进行荧光RAA扩增，在5min 时即可观察到明显的荧光信号，随着拷贝数的不断降低，检测到荧光信号的时间也随之延长。不同拷贝数的扩增均在10 mn内完成，最低可检出的质粒浓度为 10拷贝/。以曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫及华支睾吸虫基因组 DNÀ 为模板的荧光 RAA 扩增结果均为阴性。不同剂量尾蚴感染的免粪中提取的 DNA 样品经荧光 RAA 检测，均能得到有效的扩增，检测可在 15 mn 内完成。含不同数量阳性钉螺的 50 只阴性钉螺提取的日本血吸虫 DNA经荧光 RAA 检测,均能得到有效的扩增，检测可在 10min 内完成。结论本研究建立的可检测日本血吸虫核酸片段的荧光 RAA方法，反应快捷，感性和特性均较高。

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