重组酶介导等温核酸扩增方法快速检测土壤沙门氏菌_郭雨

沙门氏菌(Salmonella)是一种可以引起人畜患病的致病菌，也是最主要的食源性细菌之一。土壤中的沙门氏菌可通过蔬菜等植物进入人体，引发食物中毒。但由于土壤性质及其他微生物的干扰，如何快速甄别土壤是否受到沙门氏菌的污染仍是一个难题。【目的】建立一种快速、灵敏检测土壤沙门氏菌的实时重组酶介导等温核酸扩增(real-time recombinase aided amplification，RT-RAA)方法。【方法】针对沙门氏菌 invA 基因序列设计特异性引物和探针，构建含有 invA 基因待检片段的重组质粒，评价 RT-RAA 方法的灵敏度；分别以沙门氏菌、大肠杆菌、福氏志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的基因组 DNA 为模板，评价RT-RAA 方法的特异性；RT-RAA 方法用于番茄、生姜土壤中沙门氏菌的检测，同时用平板培养法进行验证。【结果】 RT-RAA 方法可用于重组质粒中 invA 基因片段的检测，在 39 °C条件下，20 min 内即可获得检测结果，最低检测质粒拷贝数为 10 拷贝/反应，而且与大肠杆菌、福氏志贺氏菌和金黄色葡萄球菌无交叉反应。土壤样品 DNA 的 RT-RAA 检测结果显示，番茄土已被沙门氏菌污染，而生姜土则没有，与平板培养结果一致。【结论】 RT-RAA 方法具有灵敏度高和特异性强的特点，可用于土壤沙门氏菌污染的快速检测。

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