牛病毒性腹泻病毒1型RT-RAA快速诊断方法的建立_范颖

为解决牛病毒性腹泻病毒（BVDV）现场快速诊断难点，提升应急响应速度，根据 BVDV 1 型基因组 5'-UTR保守区序列设计特异性引物和探针，建立了 BVDV 1 型重组酶聚合酶等温核酸扩增方法（reverse transcription recombinase aid amplification，RT-RAA），并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估。结果显示：该方法在 39 ℃等温条件下检测时间为 20 min，对 BVDV 1 型核酸检测下限为 1.2×102 copies/μL；3 个浓度梯度的核酸组内重复性试验的变异系数（CV）分别为 3.24%、9.48% 和 8.79%，均在 10.00% 以内，重复性好；建立的方法与猪瘟病毒、牛冠状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等无特异性反应。对 66 份临床样品进行检测，发现所建立的方法与荧光定量 PCR 检测结果符合率为 98.48%，Kappa 值为 0.881（P ＜ 0.001）。结果表明，本研究建立的RT-RAA 快速诊断方法特异性强、灵敏度高、操作便捷，可用于 BVDV 1 型的现场快速检测。

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