重组酶介导的日本血吸虫特异性基因片段核酸等温扩增检测方法的建立-江苏血防所

[摘要] 目的建立一种可用于日本血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(RAA)。方法以日本血吸虫SiG28基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计合成引物,建立并优化RAA反应体系。应用此方法与聚合酶链式反应(PCR)同时扩增梯度稀释的含不同拷贝数的SjG28 基因片段TA克隆质粒及不同浓度的基因组 DNA,以评价其敏感性:应用此方法检测曼氏血吸虫、似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组 DNA及健康人血基因组 DNA,以评价其特异性。结果建立的RAA法可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株成虫及虫卵基因组DNA,反应可在30min内完成。以重组质粒为模板,RAA法最低可检出的质粒拷贝数为20个/μL;以基因组DNA为模板,RAA法最低可检测浓度为0.01nμ1。建立的RAA法以健康人全血基因组DNA及曼氏血吸虫成虫,似蚓蛔线虫、十二指肠钩口线虫基因组 DNA为模板的扩增结果均为阴性。结论本研究建立了一种反应快捷、敏感性和特异性均较高的RAA方法,其具有应用于日本血吸虫病基因诊断的价值。

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