CRISPR - Cas13a 结合重组酶介导的扩增快速检测副溶血性弧菌方法的建立-江苏疾控

摘要:目的将重组酶介导的扩增(RAA)技术与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白 13(CRISPR-Cs13a)检测系统相结合,建立一种快速、灵敏、特异的副溶血性弧菌检测方法(RAA-Casl3a)。方法样本 DNA 经 RAA 扩增后,产物采用 CRISPR- Cas13a检测系统进行检测,比较 CRISPR-Casl3a与琼脂糖凝胶电泳对 RAA 产物的检测敏感性。对方法进行灵敏度与特异度测试，通过临床样本检测比较建立的方法与ma-timePcR 法的一致性。结果CRISPR-CasI3a对 RAA 产物的检测敏感性高于琼脂糖凝胶电泳法;建立的 RAA-Casl3a方法检测副溶血性弧菌的灵敏度为 10拷贝 DNA分子/反应,与其他病原体之间无交叉反应,与red- time PcR 对临床样本的检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05),二者的检测一致性较高(kappa=0.934)。结论建立的 RAA-Casl3a方法具有快速简单、灵敏特异等优点,为副溶血性弧菌的快速检测提供了新的工具。

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