CRISPR_Cas13a辅助RAA快速检测金黄色葡萄球菌的研究-南开&江苏疾控.pdf

【摘要】目的建立一种金黄色葡萄球菌快速分子检测技术。方法根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)保守区序列设计合成特异性引物,通过对反应条件进行优化,建立金黄色葡萄球菌重组酶介导的等温扩增技术(Recomnbinase aided amplification,RAA);表达纯化 CRISPR-Cas13a蛋白,设计特异的 cIRNA(CRISPR RNA),以 crRNA 引导CRISPR-Cas13a蛋白对 RAA 产物进行检测;对优化的方法进行灵敏性和特异性评价,同时采用该方法与 rea+time PCR法对食品标本中的金黄色葡萄球菌进行检测,评价方法的一致性。结果 CRISPR-Casl3a 辅助 RAA 检测金黄色葡蒟球萌的灵敏度为 10’ CFU/ml,高于 reaktime PCR,约 10’CFU/ml,检测时间仅需 30 mimn,与其他食源性致病萌无交叉反应:该方法和 reaktime PCR 检测 80份食品样品的阳性率均为8.75%,具有高度一致性(Kappa=1,P>0.05)。结论建立的 CRISPR-Cas13a辅助 RAA方法具有简便,快速,灵敏,特异等优点,为金黄色葡萄球萌的检测提供了新的技术手段。

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