中东呼吸综合征冠状病毒RT_RAA快速检测方法的建立及应用-宁波国旅&宁波检验检疫

摘要：建立基于重组酶介导的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-COV)核酸检测方法。本研究设计、合成特异性中东呼吸综合征冠状病毒基因的重组酶介导检測(RAA)引物及探针,制备 MERS-CoV 假病毒颗粒阳性对照品,通过一系列条件优化建立了 MERS-CoV的快速,灵敏,特异的 RT-RAA检测方法,分别与荧光定量 RT-PCR 检测方法做比较,并且采用首例中国 MERS-CoV韩国地区输人病例的咽拭子样品,其它类似呼吸道病毒样本以及英国 QC-MD的 MERSCOV室间质评灭活样本做临床验证。结果显示:建立的 RT-RAA方法检测中东呼吸综合征冠状病毒灵敏度为 10拷贝,高于本实验室建立的荧光 RT-PCR方法灵敏度(100 拷贝),且检测时间(4 8~13.6min)大大低于荧光 RT-PCR检测时间(90min):用该方法检测中东呼吸综合征冠状假病毒颗粒为阳性,而检测其他8种对照呼吸道病毒均呈阴性:检测临床阳性样本也与实际结果相符。本研究建立的中东呼吸综合征冠状病毒 RT-RAA检测方法灵敏、特异,快速,可用于中东呼吸综合征冠状病毒感染的现场快速诊断和流行病学调查。

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