中东呼吸综合征冠状病毒重组酶介导核酸检测方法的建立-宁波国旅&宁波检验检疫

摘要：目的建立快速、敏感,特异的逆转录重组酶介导(Reverse-transcription recombinase-aid assay,RT-RAA)核酸检测方法,用于中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CV)的检测。方法根据 MERS-CoV 基因的保守序列设计并合成特异性 RAA 引物及探针。通过条件优化,以 10倍系列稀释经第3代慢病毒载体构建的假病毒颗粒阳性标准品为模板,进行RT-RAA扩增,并进行特异性,敏感性以及临床样本检测。结果建立的 RT-RAA 方法检测 MERS-CoV 假病毒颗粒阳性标准品的灵敏度为 10 拷贝/ml,高于实时荧光 RT-PCR方法(10拷贝/m):用该方法检测 MERS-CoV 假病毒颗粒有明显扩增,而甲型 HIN1流感病毒,乙型流感病毒,呼吸道合胞病毒,鼻病毒等4种呼吸道病毒的检测均为阴性;检测我国首例输人性 MERS 病例的临床样本及」例英国 OCMD协会的室间质评阳性灭活样本均能检出,与实际结果相符。检测时间(20 min)大大低于实时荧光 RT-PCR(90min)。结论建立的 MERS-CV RT-RAA 检测方法灵敏、特异、快速,可用于 MERS-CoV感染的现场快速检测和流行病学调查。

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